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細(xì)胞凍存的程序降溫盒的使用注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-03-07 點(diǎn)擊次數(shù):10701
   
細(xì)胞凍存有兩種方法:傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃、-20℃、-80℃保存,程序降溫方法是利用程序降溫盒設(shè)定程序由室溫降低至-80℃,最后再放置到液氮槽中長(zhǎng)期保存。程序降溫盒的使用注意事項(xiàng)如下:  
實(shí)驗(yàn)室雖然有程序降溫凍存盒,但怎么使用一直都搞不明白,我覺(jué)得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時(shí)間(細(xì)胞剛開始還沒(méi)凍的時(shí)候就是室溫),然后把細(xì)胞放進(jìn)去,再一起移到-80度,這樣才能實(shí)現(xiàn)程序降溫呢?時(shí)間使用長(zhǎng)了,感覺(jué)里面的液體是不是異丙醇啊,使用時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)不會(huì)揮發(fā)或變質(zhì)什么的,要不要添加或維護(hù)一下呢,還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分,要補(bǔ)充嗎?  
經(jīng)驗(yàn)1:凍存盒外表面有刻度的吧,異丙醇液面要高于最底線。  
凍存盒肯定是先放在室溫,然后放進(jìn)去細(xì)胞,置于-80,利用異丙醇實(shí)現(xiàn)梯度降溫啊。) 
根據(jù)論壇里的討論,異丙醇使用過(guò)一段時(shí)間后是要更換的,但是我一直沒(méi)換過(guò),也沒(méi)發(fā)現(xiàn)很大問(wèn)題。  
經(jīng)驗(yàn)2:我們實(shí)驗(yàn)室凍存盒平時(shí)放4度,需要凍細(xì)胞時(shí)直接拿出來(lái)用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮,貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移,不然會(huì)影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?,F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的,很方便,效果也不錯(cuò)的。  
經(jīng)驗(yàn)3:異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉(zhuǎn)移到液氮,效果很不錯(cuò)。異丙醇熔點(diǎn):-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性!急性毒性:口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤。刺激數(shù)據(jù):眼睛-兔子100毫克/!請(qǐng)注意清理!  
經(jīng)驗(yàn)4:應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的,因?yàn)樘荻冉禍氐钠鹗键c(diǎn)是室溫20°左右,所以從-80℃拿出來(lái)的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時(shí)間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次,而且保證液體量達(dá)到刻度線,否則降溫效果會(huì)受到影響。  
經(jīng)驗(yàn)5:凍存盒里的異丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理論上是5次以后更換異丙醇,但是異丙醇對(duì)環(huán)境有害,我們可以多用幾次,只是少了的時(shí)候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對(duì)細(xì)胞有毒性,尤其是室溫的時(shí)候,所以凍存盒和凍存液先放4°,等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,還放回4°,等到出細(xì)胞間的時(shí)候再拿到-80°里面保存。過(guò)夜再轉(zhuǎn)入液氮。  
程序降溫盒這個(gè)梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率,由于程序降溫盒內(nèi)存在*濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯,因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇  
 

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