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淺析細(xì)胞凍存液凍存的過程

更新時(shí)間:2017-12-22 點(diǎn)擊次數(shù):1271
細(xì)胞凍存液首先關(guān)鍵在于冷凍保護(hù)劑,一般常用DMSO此類滲透性保護(hù)劑,一般是以9份小牛血清或細(xì)胞培養(yǎng)液與1份的DMSO混合而成,現(xiàn)配現(xiàn)用或配置后放入普通冰箱冰盒內(nèi)冷凍保存,使用前于室溫水浴融化。關(guān)鍵在于DMSO的終濃度為10%,對于普通細(xì)胞來說,小牛血清濃度似乎高點(diǎn)越好,但沒有這個(gè)必要,用細(xì)胞培養(yǎng)液即可。
細(xì)胞凍存
1.預(yù)先配制凍存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存預(yù)冷;
2.用胰酶對細(xì)胞進(jìn)行消化:倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,PBS沖洗兩次,用胰酶消化細(xì)胞(盡可能溫和);
3.再次用*培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞,將預(yù)冷的凍存液加入消化*的細(xì)胞中,用滴管輕輕吹打混勻。
4.在每支凍存管中加入1ml細(xì)胞液,密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。
5.凍存步驟的細(xì)致直接關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的活力,如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過*,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐。
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